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米乐m6登录MRC-5 人肺二倍体细胞 基础介绍与培养传代

发布时间：2024-05-19 04:53:15 来源：米乐m6官网在线登录 作者：米乐m6官网平台

　　加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化；

　　按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀；

　　收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1：2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中，建议冻存一支备用，后续传代根据实际情况按1:2到1:4的比例进行。

　　细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数；

　　4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x10(6)/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识；

　　将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

　　2.先不打开培养瓶盖，用75%酒精处理培养瓶表面，如果是贴壁细胞， 请在培养箱中静置2-3小时（根据细胞密度状况决定）用来稳定细胞状态。如果是悬浮细胞则不需要静置，直接按照悬浮细胞步骤操作。


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